NCI-H508细胞:人盲肠癌细胞详细介绍及细胞培养注意事项

NCI-H508细胞:人盲肠癌细胞详细介绍及细胞培养注意事项
NCI-H508细胞作为结肠直肠腺癌的研究模型,其采购、储存、复苏、培养及品质鉴定的全过程对于科研人员至关重要。掌握正确的操作方法、注意关键环节、及时处理常见问题,能够确保细胞培养工作的顺利进行。通过应用NCI-H508细胞,科学家们能够在多个领域深入探索结肠直肠癌的生物学特性,推动相关疾病的预防、诊断与治疗进步。

细胞概述

中文名称

结肠直肠腺癌细胞

英文名称

Human Colorectal Adenocarcinoma Cells

NCI-H508细胞是一种源自人结肠癌组织的人源性肿瘤细胞系。该细胞系在体外具有良好的增殖能力,保留了结肠癌细胞的主要生物学特性,被广泛应用于癌症研究,包括但不限于肿瘤发生机制探究、药物筛选、基因功能验证、化疗敏感性评估以及肿瘤免疫学研究。


细胞参数

NCI-H508细胞通常以T25培养瓶规格提供,包含细胞数量一般为≥5×10^5 cells/T25瓶。细胞在正常培养条件下呈贴壁生长,形态为上皮细胞样。推荐使用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养基进行培养。细胞传代周期一般为3~4天,传代比例通常为1:2。


价格参考

NCI-H508细胞的价格因供应商、市场需求及促销活动等因素而有所波动。通常情况下,单瓶细胞的售价在几百元人民币范围内。具体价格需直接联系信誉良好的细胞库或供应商查询,或者通过在线生物科研产品平台获取实时报价。


购买渠道与细胞来源

购买NCI-H508细胞时,建议优先选择国际公认的细胞库如美国典型培养物保藏中心(ATCC)或国内有资质的生物制品供应商。确保所购细胞具有明确的来源信息,如患者背景、病理类型、建立年代等,并附有完整的细胞系认证报告,如STR分型分析以确认其遗传一致性。


储存与复苏方法

储存

  • 液氮储存:将冻存于冻存液中的细胞存放于液氮罐内或液氮气相区,保持在-196℃稳定低温状态。

复苏

  1. 取出细胞:在生物安全柜中迅速取出冻存管,浸入37℃水浴中温和解冻,避免直接暴露于室温导致细胞损伤。
  2. 洗涤与稀释:当冻存液几乎完全融化时,立即将细胞转移至预热的无菌培养基中,轻轻吹打混匀,去除残留冻存液。
  3. 离心与重悬:以适当速度离心细胞悬液,弃去上清液,用预热的完全培养基小心重悬细胞沉淀。
  4. 接种与培养:将细胞均匀接种到预先涂覆适宜基质的培养容器内,置于37℃、5% CO2的恒温恒湿培养箱中培养。

培养所需仪器设备

  • 细胞培养箱:提供稳定的温度、湿度和二氧化碳浓度环境,维持细胞生长条件。
  • 倒置显微镜:用于观察细胞形态、生长状态及有无污染。
  • 离心机:用于细胞收集、清洗及分离。
  • 水浴锅:用于细胞冻存液的融化及试剂预热。
  • 生物安全柜:确保无菌操作环境。
  • 移液器:精确转移细胞悬液及试剂。
  • 培养皿与培养瓶:供细胞附着和生长。
  • CO2气体瓶与监控系统:维持培养箱内CO2浓度稳定。

培养步骤

  1. 培养基准备:根据细胞特性,按照配方配制无菌RPMI 1640培养基,加入指定比例的胎牛血清和其他必需添加剂,充分混匀后过滤除菌。
  2. 细胞接种:在生物安全柜内,将复苏后的NCI-H508细胞以适当密度均匀接种至预处理好的培养容器内。
  3. 日常观察与换液:每日检查细胞生长情况,记录细胞形态、密度及分裂状态。根据细胞生长速度,每隔一定天数更换新鲜培养基。
  4. 传代:当细胞密度达到约80%融合时,进行传代操作。先用胰酶或细胞刮刀使细胞脱离培养表面,离心收集细胞,重新调整细胞浓度后接种至新的培养器皿。

培养注意事项

  • 无菌操作:全程遵循严格的无菌操作规程,防止微生物污染。
  • 生长条件控制:确保培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定,定期校准。
  • 定期监测:定期进行细胞活力检测、形态观察和支原体检测,确保细胞健康状态。
  • 记录与标签:详细记录细胞培养过程,包括传代次数、冻存时间等关键信息,并清晰标记细胞瓶。

常见问题与解决办法

  • 生长停滞:检查培养基成分是否失效、血清是否过期,尝试更换新鲜培养基或优质血清。
  • 形态异常:排查培养条件是否改变,是否存在污染,必要时进行抗生素处理或重新复苏。
  • 生长过快/过慢:调整细胞接种密度,或检查细胞是否进入衰老期,考虑适时传代。

品质鉴别

  • 形态学鉴定:通过显微镜观察细胞形态是否符合文献描述和标准图像。
  • 生长曲线分析:记录细胞增殖速率,绘制生长曲线,评估细胞活性。
  • 分子生物学鉴定:如STR分型、基因表达谱分析等,验证细胞遗传稳定性。

应用领域

NCI-H508细胞主要应用于:

  • 肿瘤生物学研究:探究结肠直肠癌的发生发展机制、侵袭转移能力及耐药性。
  • 药物筛选与药效评价:测试抗肿瘤药物的效力与毒性,筛选潜在治疗候选物。
  • 基因功能研究:利用基因编辑技术研究特定基因在结肠癌进展中的作用。
  • 免疫治疗研究:评估免疫疗法对结肠癌细胞的效应,探索新型免疫治疗策略。

全文总结

NCI-H508细胞作为结肠直肠腺癌的研究模型,其采购、储存、复苏、培养及品质鉴定的全过程对于科研人员至关重要。掌握正确的操作方法、注意关键环节、及时处理常见问题,能够确保细胞培养工作的顺利进行。通过应用NCI-H508细胞,科学家们能够在多个领域深入探索结肠直肠癌的生物学特性,推动相关疾病的预防、诊断与治疗进步。

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熊熊
  • 本文由 熊熊 发表于 2024年2月23日13:36:29
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