HepG2.2.15细胞:人肝癌细胞(稳定表达HBV)详细介绍及细胞培养注意事项

HepG2.2.15细胞:人肝癌细胞(稳定表达HBV)详细介绍及细胞培养注意事项
HepG2.2.15细胞源于人肝癌细胞系HepG2,通过转染含有HBV基因组片段的质粒或感染HBV颗粒,使细胞稳定表达HBV。此类细胞通常由国际知名的细胞库(如ATCC、DSMZ等)或经授权的生物技术公司提供。

中英文名称

中文名称:HepG2.2.15人肝癌细胞(稳定表达HBV)

英文名称:HepG2.2.15 Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line (Stably Expressing HBV)


细胞概述

HepG2.2.15细胞是一种源自人肝癌细胞系HepG2,经过改造使其稳定表达乙肝病毒(HBV)的细胞系。该细胞株保留了HepG2细胞的上皮细胞样形态和快速增殖特性,同时具有持续产生HBV抗原(如HBsAg、HBeAg)和分泌HBV病毒颗粒的能力。HepG2.2.15细胞常用于乙肝病毒感染机制研究、抗病毒药物筛选、疫苗研发、肝癌发病机制探讨以及药物肝毒性的评估等实验。


细胞参数分类

  1. 细胞形态:上皮细胞样,呈圆形、多边形或不规则形状,排列紧密。
  2. 生长特性:贴壁生长,细胞在培养基中附着于培养容器底部,形成单层细胞群落。
  3. 组织来源:人肝癌,源自患者肿瘤组织,经改造使其稳定表达HBV。
  4. HBV表达特性:持续产生HBsAg、HBeAg,分泌HBV病毒颗粒,具有完整的HBV生命周期。
  5. 药物敏感性:对某些抗HBV药物(如恩替卡韦、阿德福韦等)可能具有一定的敏感性。
  6. STR鉴定:完成STR分析,确保细胞株的遗传稳定性。

HepG2.2.15细胞价格范围

HepG2.2.15细胞的价格受市场供需、供应商、规格(如细胞数量、是否含鉴定报告等)等因素影响,大致在人民币1000元至2000元之间。实际价格建议直接咨询多个合规生物制品供应商以获取最新报价。


选择HepG2.2.15细胞购买渠道

资质认证:首选具备ISO、GMP、ATCC等国际或国内认可资质的供应商,确保细胞来源合规、质量有保证。

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HepG2.2.15细胞来源

HepG2.2.15细胞源于人肝癌细胞系HepG2,通过转染含有HBV基因组片段的质粒或感染HBV颗粒,使细胞稳定表达HBV。此类细胞通常由国际知名的细胞库(如ATCC、DSMZ等)或经授权的生物技术公司提供。


HepG2.2.15细胞储存及复苏方法

储存:HepG2.2.15细胞可短期常温保存或长期液氮冻存。冻存时,将细胞与冻存液混合后装入冻存管,储存在液氮罐(-196℃)中。

复苏

  • 解冻:将冻存管迅速放入37℃水浴中,轻轻摇动直至冻存液完全融化。
  • 洗涤:弃去冻存液,用适量预热的完全培养基重悬细胞。
  • 接种:将细胞悬液均匀滴加到已添加合适培养基的培养容器中,置于37℃、5%CO₂培养箱中培养。

HepG2.2.15细胞培养所需仪器设备及功能使用说明

  1. 细胞培养箱:维持恒定的温度(37℃)、湿度和CO₂浓度(5%),为HepG2.2.15细胞提供稳定的生长环境。
  2. 倒置显微镜:观察HepG2.2.15细胞形态、密度和生长状态,进行日常监测和拍照记录。
  3. 离心机:用于细胞传代时的收集与重悬,确保细胞均匀分散。
  4. 超净工作台:提供无菌操作条件,防止细胞培养过程中受到微生物污染。
  5. 移液器:精确吸取和分配培养基、细胞悬液及其他试剂。
  6. 培养皿/瓶/板:承载HepG2.2.15细胞生长的容器,根据实验需求选用不同规格。
  7. 水浴锅:用于细胞冻存液的快速升温解冻。

HepG2.2.15细胞培养步骤

  1. 配制培养基:按照要求配制完全培养基(如MEM+10%FBS+1%双抗),部分实验可能需要额外添加抗病毒药物以抑制HBV复制。
  2. 消毒工作区:使用酒精或消毒剂擦拭超净台表面。
  3. 启动培养箱:设定温度为37℃,CO₂浓度为5%,预热。
  4. 接种细胞:将复苏或传代后的HepG2.2.15细胞均匀接种至预置培养基的培养容器中。
  5. 定期观察:每日或按需使用倒置显微镜检查HepG2.2.15细胞状态。
  6. 更换培养基:根据细胞生长速率,定期更换新鲜培养基,清除代谢废物。
  7. 细胞传代:当HepG2.2.15细胞密度达到适宜范围时,使用胰酶或EDTA等消化液处理,随后稀释并重新接种。

HepG2.2.15细胞培养注意事项

  • 无菌操作:严格执行无菌操作规程,避免微生物污染。
  • 环境控制:保持恒定的培养条件,防止温度、湿度和气体环境波动。
  • 细胞计数:定期进行HepG2.2.15细胞计数,准确调整细胞密度并判断传代时机。
  • 定期检测:定期进行支原体检测,确保无潜在污染。
  • 试剂质量:使用合格、无菌、未过期的培养基和试剂。
  • HBV表达监控:定期检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平,以确认HBV持续表达。
  • 药物敏感性:在相关实验中,注意细胞对特定抗HBV药物的反应性。

HepG2.2.15细胞培养常见问题及解决方法

问题:HepG2.2.15细胞生长缓慢或停滞。 解决:检查培养基成分、pH值、CO₂浓度是否适宜,考虑更换供应商或批次。排查是否存在污染。

问题:HepG2.2.15细胞形态异常或HBV表达下降。 解决:观察细胞是否存在扁平化、空泡化、脱落等现象,或HBV抗原及DNA水平显著降低,可能是污染、营养不良、过度传代或HBV复制抑制不当所致,需调整培养条件、重新复苏或更换细胞批次。

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熊熊
  • 本文由 熊熊 发表于 2024年2月23日13:33:15
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